數理化 > rna斑點雜交
目錄
No. 1
  與dna斑點雜交類似,每個樣品至多加10μg總rna(經酚/氯仿或異硫氰酸胍提取純化)。方法是將rna溶於5μldepc水,加15μl甲醛/ssc緩衝液(10×ssc中含0.15mol/l 甲醛)使rna變性。然後取5~8μl點樣於處理好的濾膜上,烘幹。
  培養細胞,標本處理技術可以簡化,不用提取和純化rna。方法是用含0.5%nonidet p40的低滲緩衝液對多種動物細胞作簡單處理,離心去掉細胞核和細胞碎片,就得到基本不帶dna而富含rna的細胞質提取物,這一粗rna在高????下用甲醛變性,不需加工直接點到硝酸纖維素膜上。本法可以快速檢測大量標本,而衹需極少量的細胞(5×104)或組織。
  整個rna實驗中,要防止激活內源性rnase,有許多種預防措施,有一種是在樣品中加入核糖核苷氧礬基復合物(rvc)。
No. 2
  與DNA斑點雜交類似,每個樣品至多加10μg總RNA(經酚/氯仿或異硫氰酸胍提取純化)。方法是將RNA溶於5μlDEPC水,加15μl甲醛/SSC緩衝液(10×SSC中含0.15mol/l 甲醛)使RNA變性。然後取5~8μl點樣於處理好的濾膜上,烘幹。
  培養細胞,標本處理技術可以簡化,不用提取和純化RNA。方法是用含0.5%Nonidet P40的低滲緩衝液對多種動物細胞作簡單處理,離心去掉細胞核和細胞碎片,就得到基本不帶DNA而富含RNA的細胞質提取物,這一粗RNA在高????下用甲醛變性,不需加工直接點到硝酸纖維素膜上。本法可以快速檢測大量標本,而衹需極少量的細胞(5×104)或組織。
  整個RNA實驗中,要防止激活內源性RNase,有許多種預防措施,有一種是在樣品中加入核糖核苷氧礬基復合物(RVC)。