|
|
zhí wù tǐ xì bāo zá jiāo （ somatichybridization） , yòu chēng yuán shēng zhì tǐ róng hé（ protoplastfusion）
zhǐ jiāng zhí wù bù tóng zhǒng、 shǔ， shèn zhì kē jiān de yuán shēng zhì tǐ tōng guò rén gōng fāng fǎ yòu dǎo róng hé， rán hòu jìn xíng lí tǐ péi yǎng， shǐ qí zài shēng zá zhǒng zhí zhū de jì shù。 zhí wù xì bāo jù yòu xì bāo bì， wèi tuō bì de liǎng gè xì bāo shì hěn nán róng hé de， zhí wù xì bāo zhǐ yòu zài tuō qù xì bāo bì chéng wéi yuán shēng zhì tǐ hòu cái néng róng hé， suǒ yǐ zhí wù de xì bāo róng hé yě chēng wéi yuán shēng zhì tǐ róng hé。 wén zì |
|
dìng yì
zhí wù tǐ xì bāo zá jiāo （ Somatichybridization） , yòu chēng yuán shēng zhì tǐ róng hé（ Protoplastfusion） shì zhǐ jiāng zhí wù bù tóng zhǒng、 shǔ， shèn zhì kē jiān de yuán shēng zhì tǐ tōng guò rén gōng fāng fǎ yòu dǎo róng hé， rán hòu jìn xíng lí tǐ péi yǎng， shǐ qí zài shēng zá zhǒng zhí zhū de jì shù。 zhí wù xì bāo jù yòu xì bāo bì， wèi tuō bì de liǎng gè xì bāo shì hěn nán róng hé de， zhí wù xì bāo zhǐ yòu zài tuō qù xì bāo bì chéng wéi yuán shēng zhì tǐ hòu cái néng róng hé， suǒ yǐ zhí wù de xì bāo róng hé yě chēng wéi yuán shēng zhì tǐ róng hé。
zhí wù xì bāo zá jiāo de jǐ gè zhòng yào jìn zhǎn
1960 nián， Kocking yòng méi fǎ zhì bèi gāo děng zhí wù yuán shēng zhì tǐ shǒu cì huò dé chéng gōng；
1970 nián， Power shǒu cì yòng xiāo suān nà jìn xíng wéi yòu dǎo jì jìn xíng liǎo jiào dà guī mó de yuán shēng zhì tǐ yòu dǎo róng hé；
1971 nián， Takebe shǒu cì cóng lí tǐ yān cǎo yuán shēng zhì tǐ péi yǎng zhōng huò dé zài shēng wán zhěng zhí zhū；
1972 nián， Carlson shǒu cì huò dé fěn lán yān cǎo hé láng shì yān cǎo de xì bāo zá zhǒng， zhè yě shì dì yī gè zhí wù xì bāo zá zhǒng；
1974 nián， Kao jiāng jù yǐ 'èr chún yòu dǎo róng hé fǎ yìng yòng yú zhí wù xì bāo róng hé bìng jiàn lì liǎo xiāng yìng de róng hé jì shù；
1978 nián， Melchers huò dé liǎo dì yī gè shǔ jiān xì bāo zá zhǒng（ fān qié ＋ mǎ líng shǔ）；
1981 nián， Zimmerman fā míng liǎo diàn róng hé yí， bìng shǒu cì tí chū liǎo diàn róng hé gài niàn；
1987 nián， Schweiger jiàn lì liǎo dān duì yuán shēng zhì tǐ diàn róng hé jì shù chéng xù。
fēn lèi
gēn jù róng hé shí xì bāo de wán zhěng chéng dù， yuán shēng zhì tǐ róng hé kě fēn wéi liǎng dà lèi：
duìchèn róng hé（ asymmetricfusion） － jí liǎng gè wán zhěng de xì bāo yuán shēng zhì tǐ róng hé。
fēi duìchèn róng hé（ symmetricfusion）－ lì yòng wù lǐ huò huà xué fāng fǎ shǐ mǒu qīn běn de hé huò xì bāo zhì shī huó hòu zài jìn xíng róng hé， tā kě yǐ fēn wéi jǐ zhǒng：
yòng yú xì bāo hé huò xì bāo zhì shī huó de fāng fǎ fēn wéi wù lǐ hé huà xué liǎng dà lèi：
wù lǐ fāng fǎ cháng cǎi yòng shè xiàn chǔlǐ， rú X shè xiàn、 shè xiàn děng， tā men néng shǐ xì bāo hé shī huó；
huà xué chǔlǐ mù qián cháng yòng de shì jì yòu， hé shī huó－ diǎn yǐ xiān 'àn（ IOA）、 diǎn yǐ suān (Iodoacetate)； zhì shī huó－ luó dān míng（ R－ 6－ G， tā shì yī zhǒng qīn zhī rǎn liào， néng gòu yì zhì xiàn lì tǐ de yǎng huà lín suān huà guò chéng 'ér dá dào shī huó zuò yòng。
guò chéng
jiāng zhí wù xì bāo A yǔ zhí wù xì bāo B yòng xiān wéi sù méi hé guǒ jiāo méi chǔlǐ， dé dào bù hán xì bāo bì de yuán shēng zhì tǐ A hé yuán shēng zhì tǐ B， yùn yòng wù lǐ fāng fǎ huò shì huà xué fāng fǎ yòu dǎo róng hé， xíng chéng zá zhǒng xì bāo， zài lì yòng zhí wù xì bāo péi yǎng jì shù jiāng zá zhǒng xì bāo péi yǎng chéng zá zhǒng zhí wù tǐ。
① zá jiāo shí jiān： zhí wù xì bāo zá jiāo shì cóng xì bāo róng hé kāi shǐ， dào péi yù chéng de xīn zhí wù tǐ jié shù。
a. yuán shēng zhì tǐ zhì bèi： yòng méi jiě fǎ qù chú xì bāo bì（ xiān wéi sù méi hé guǒ jiāo méi）
b. yuán shēng zhì tǐ róng hé： mó róng hé（ gāo gài、 gāo pH yòu dǎo róng hé）、 hé róng hé（ zá zhǒng xì bāo dì yī cì yòu sī fēn liè shí róng hé）
yuán shēng zhì tǐ de róng hé
yī、 róng hé fāng fǎ
1 ． PEG yòu dǎo róng hé fǎ
PEG yòu dǎo róng hé de tè diǎn： qí yōu diǎn shì róng hé chéng běn dī， wù xū tè shū shè bèi； róng hé zǐ chǎn shēng de yì hé shuài jiào
gāo； róng hé guò chéng bù shòu wù zhǒng xiàn zhì。 qí quē diǎn shì róng hé guò chéng fán suǒ， PEG kě néng duì xì bāo yòu dú hài。
PEG de zuò yòng jī lǐ： Kao děng rèn wéi， yóu yú PEG fènzǐ jù yòu qīng wēi de fù jí xìng， gù kě yǐ yǔ jù yòu zhèng jí
xìng jī tuán de shuǐ、 dàn bái zhì hé tàn shuǐ huà hé wù děng xíng chéng H jiàn， cóng 'ér zài zài yuán shēng zhì tǐ zhī jiān xíng chéngfèn zǐ qiáo， qí
huá zhōng nóng yè dà xué chuàng jiàn guó jiā jīng pǐn kè chéng héng héng xì bāo gōng chéng xué wén běn jiào 'àn ( dì qī zhāng ) zhù jiǎng jiào shī： liǔ jùn bó shì、 jiào shòu
jiēguǒ shì shǐ yuán shēng zhì tǐ fā shēng zhānlián jìn 'ér cù shǐ yuán shēng zhì tǐ de róng hé； lìng wài， PEG néng zēng jiā lèi zhī mó de liú dòng
xìng， yě shǐ yuán shēng zhì tǐ de hé、 xì bāo qì fā shēng róng hé chéng wéi kě néng。
róng hé jì shù yào diǎn：
róng hé yè： CaCl2·2H2O8~10mmol
KH2PO40.7mmol
gān lù chún huò shān lí chún 0.5~1.0mol
pH5.6
yòu dǎo yè： róng hé yè＋ PEG20 ～ 45 ％
xī shì yè： A yè（ g/100ml） pH6.0B yè（ g/100ml） pH10.5
pú táo táng 7.21 gān 'ān suān 0.375
CaCl2·2H2O0.79NaOH0.169
DMSO10ml
2． diàn róng hé fǎ
yǔ PEG róng hé bǐ jiào qǐ lái， diàn róng hé yòu sān dà yōu diǎn： yī shì bù cún zài duì xì bāo de dú hài wèn tí； èr shì róng hé xiào
shuài gāo； sān shì róng hé jì shù cāo zuò jiǎn biàn。
diàn róng hé yí de jié gòu tè diǎn： yī shì jiāo biàn diàn chǎng bù fēn； yī shì gāo pín zhí liú diàn jī bù fēn。
diàn róng hé de jī běn guò chéng：
xì bāo mó de jiē chù： dāng yuán shēng zhì tǐ zhì yú diàn dǎo shuài hěn dī de róng yè zhōng shí， diàn chǎng tōng diàn hòu， diàn liú jí tōng guò yuán shēng
zhì tǐ 'ér bù shì tōng guò róng yè， qí jiēguǒ shì yuán shēng zhì tǐ zài diàn chǎng zuò yòng xià jí huà 'ér chǎn shēng 'ǒu jí zǐ， cóng 'ér shǐ yuán shēng zhì tǐ
jǐn mì jiē chù pái liè chéng chuàn；
P1P2
P1P2
hùn hé jìng zhǐ 1min.
róng hé
róng hé yè
jiā rù PEG
xī shì xǐ dí
jiā rù xī shì yè
jiā rù péi yǎng jī
péi yǎng
xuǎn zé
huá zhōng nóng yè dà xué chuàng jiàn guó jiā jīng pǐn kè chéng héng héng xì bāo gōng chéng xué wén běn jiào 'àn ( dì qī zhāng ) zhù jiǎng jiào shī： liǔ jùn bó shì、 jiào shòu
mó de jī chuān： yuán shēng zhì tǐ chéng chuàn pái liè hòu， lì jí jǐyǔ gāo pín zhí liú mài chōng jiù kě yǐ shǐ yuán shēng zhì mó jī chuān， cóng 'ér
dǎo zhì liǎng gè jǐn mì jiē chù de xì bāo róng hé zài yī qǐ。
guān yú róng hé cān shù： diàn róng hé zhōng de zhù yào cān shù bāo kuò jiāo liú diàn yā、 jiāo biàn diàn chǎng de zhèn fú pín shuài、 jiāo biàn diàn chǎng de
chǔlǐ shí jiān； zhí liú gāo pín diàn yā、 mài chōng kuān dù、 mài chōng cì shù děng。
yǐng xiǎng yuán shēng zhì tǐ róng hé de yīn sù
shǒu xiān， yuán shēng zhì tǐ zhì liàng duì xì bāo de róng hé qǐ zhe zhì guān zhòng yào de zuò yòng， gāo zhì liàng de yuán shēng zhì tǐ shì xì bāo róng hé
de shǒu yào tiáo jiàn。
qí cì， róng hé fāng fǎ
qí sān shì róng hé cān shù， bāo kuò gè zhǒng róng hé yè dū yìng xuǎn zé shìdàng。
c. fāng fǎ： wù lǐ fāng fǎ（ lí xīn、 zhèn dòng、 diàn jī）、 huà xué fāng fǎ（ jù yǐ 'èr chún（ PEG））
d. zá zhǒng xì bāo de shāi xuǎn hé péi yǎng： jī xiè fǎ、 shēng lǐ fǎ、 yí chuán fǎ
e. zá zhǒng xì bāo de zài shēng hé jiàn dìng： yóu yù shāng zǔ zhì zài péi yǎng chū zá zhǒng zhí zhū de guò chéng
zá zhǒng xì bāo de fā yù dòng tài jí tǐ xì bāo zá zhǒng jiàn dìng
yī、 zá zhǒng xì bāo de fā yù dòng tài
hé zhì zhòng zǔ
xì bāo qì zhòng zǔ
bù fēn hé wù zhì huò xì bāo qì diū shī
hé fēn liè de fēi tóng bù xìng
èr、 tǐ xì bāo zá zhǒng de tè diǎn
xíng tài shàng de qū zhōng xìng
biàn yì fú dù dà
fēi zhěng bèi xìng
shuāng qīn xìng zhuàng de gòng xiǎn xìng
piān qīn xiàn xiàng
sān、 zá zhǒng xì bāo de xuǎn zé xì tǒng yǔ zá zhǒng zhí zhū de jiàn dìng
1． zá zhǒng xì bāo de xuǎn zé xì tǒng
wài guān xuǎn zé
hù bǔ xuǎn zé
yíng guāng biāo jì xuǎn zé
2． tǐ xì bāo zá zhǒng de jiàn dìng
xíng tài jiàn dìng： gēn jù shuāng qīn de xíng tài xué xìng zhuàng guān chá jìn xíng jiàn dìng。
xì bāo xué jiàn dìng： xì bāo qì jiàn dìng、 rǎn sè tǐ jiàn dìng。
shēng huà jiàn dìng： tóng gōng méi jiàn dìng。
fènzǐ jiàn dìng： RFLP jiàn dìng、 RAPD biāo jì jiàn dìng。
tǐ xì bāo zá zhǒng de yí chuán tè xìng
1． xì bāo fēn liè yǔ rǎn sè tǐ diū shī
rú guǒ xì bāo fēn liè 'ér hé bù fā shēng róng hé， zài yǐ hòu de fā yù guò chéng zhōng jiù huì yòu liǎng zhǒng jiēguǒ， yī shì xì bāo fēn liè
jǐ cì yǐ hòu jí tíng zhǐ shēngzhǎng cóng 'ér dǎo zhì sǐ wáng； èr shì zài fā yù guò chéng zhōng mǒu yī qīn běn de xì bāo hé bù fēn huò quán bù diū shī。
rú guǒ zhè yàng jiù huì chǎn shēng jǐ zhǒng qíng kuàng： A xì bāo＋ B xì bāo zhì； A xì bāo＋ B xì bāo zhì hé bù fēn rǎn sè tǐ huò jī yīn。
2． jī yīn zhuǎn yí yǔ xìng zhuàng biǎo dá
yóu yú rǎn sè tǐ de bù fēn diū shī， cháng cháng shǐ mǒu gè qīn běn de bù fēn huò gè bié jī yīn yǔ lìng yī qīn běn de rǎn sè tǐ fā shēng
zhěng hé， qí jiēguǒ shì shí xiàn liǎo qīn běn jiān de jī yīn zhuǎn yí。 jī yīn zhuǎn yí tōng cháng shì zài hòu dài zhōng mǒu xiē xìng zhuàng dé yǐ biǎo dá， yòu
shí yóu yú jī yīn de zhòng zǔ yě kě néng chǎn shēng shuāng qīn jūn méi yòu de xīn xìng zhuàng。
3． tǐ xì bāo zá zhǒng yí chuán shàng de bù wěn dìng xìng
tǐ xì bāo zá zhǒng hòu dài zài yí chuán shàng cháng cháng bù wěn dìng， zhè kě néng shè jí dào duō fāng miàn de yīn sù， rú qīn yuán guān xì de yuǎn
jìn、 péi yǎng guò chéng zhōng de rǎn sè tǐ biàn yì、 xì bāo hé、 xì bāo zhì yí chuán wù zhì de zhòng zǔ děng。
② yōu diǎn： kè fú yuǎn yuán zá jiāo bù qīn hé de zhàng 'ài， kuò dà zá jiāo qīn běn fàn wéi， péi yù xīn yōu liáng pǐn zhǒng。
③ jǔ lì： “ bái cài - gān lán ” tóng bái cài xiāng bǐ， jù yòu shēngzhǎng qī duǎn， nài rè xìng qiáng， hé yì chǔ cáng děng yōu diǎn。
yìng yòng
tǐ xì bāo zá zhǒng de yìng yòng
yī、 tǐ xì bāo zá zhǒng de yìng yòng qián lì
1、 zhí wù yù zhǒng zhōng de hé zhì tì huàn
2、 xì bāo zhì zá zhǒng de huò dé
3、 yuǎn yuán zá jiāo chuàng zào xīn wù zhǒng
4、 xì bāo qì de hù zuò yán jiū
tǐ xì bāo zá jiāo miàn lín de kùn nán
1、 róng hé tè xìng de gāo xiào xìng
2、 zá zhǒng xì bāo de péi yǎng hé xuǎn zé
3、 zá zhǒng de yí chuán wěn dìng xìng kòng zhì
tǐ xì bāo zá jiāo yán jiū de fā zhǎn qū shì
1、 yòu dǎo róng hé jí zá zhǒng xì bāo de gè zhǒng shēng lǐ、 shēng huà、 yí chuán jī lǐ de yán jiū
2、 diàn róng hé de chéng xù huà kòng zhì yán jiū
3、 gè zhǒng lèi xíng yuán shēng zhì tǐ（ bāo zhì tǐ、 hé zhì tǐ、 xì bāo qì） de zhì bèi jì shù yán jiū
4、 zá zhǒng xì bāo péi yǎng jì shù de chéng xù huà yán jiū |