斑点杂交（dot blot）是将被检标本点到膜上，烘烤固定。这种方法耗时短，可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品，为使点样准确方便，市售有多种多管吸印仪（manifold），如minifoldⅠ和Ⅱ、bio-dot(bio-rad)和hybri-dot，它们有许多孔，样品加到孔中，在负压下就会流到膜上呈斑点状或狭缝状。反复冲洗进样孔，取出膜烤干或紫外线照射以固定标本，这时的膜就可以进行杂交。
（1）dna斑点杂交：
①先将膜在水中浸湿，再放到15×ssc中。
②将dna样品溶于水或te，煮沸5min，冰中速冷。
③用铅笔在滤膜上标好位置,将dna点样于膜上,每个样品一般点5μl(2~10μg dna)。
④将膜烘干，密封保存备用。
（2）rna斑点杂交：与上法类似，每个样品至多加10μg总rna（经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化），方法是将rna溶于5μl depc水，加5μl甲醛/ssc缓冲液（10×ssc中含6.15mol/l甲醛），使rna变性，然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上，烘干。
（3）完整细胞斑点杂交：应用类似检测细菌菌落的方法，可以对细胞培养物的特异序列进行快速检测，将整个细胞点到膜上，经naoh处理，使dna暴露、变性和固定，再按常规方法进行杂交与检测。有人曾用此法从105个培养细胞中检测到至少5pg的epstein-barr病毒dna。完整细胞斑点印迹法可以用于筛选大量标本，因为它使细胞直接在膜上溶解，所以dna含量甚至比常用的提取法还高，又不影响与32p标记的探针杂交，但它不适用于非放射性标记探针，因为dna纯度不够，会产生高本底。 |
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