|
|
incision enzyme
yī zhǒng néng cuī huà duō hé gān suān de liàn duàn liè de méi， zhǐ duì tuō yǎng hé táng hé suān nèi yī dìng jiǎn jī xù liè zhōng mǒu yī dìng wèi zhì fā shēng zuò yòng， bǎ zhè wèi zhì de liàn qiē kāi。 tōng guò nèi qiē méi kě yǐ bǎ mǒu yī gè yí chuán jī yīn qiē xià lái， ruò zài lián zài bié de xì bāo de yí chuán jī yīn shàng， biàn kě shǐ zhè xì bāo jù yòu xīn de yí chuán tè xìng。 nèi qiē méi de fā xiàn hé cǎi yòng， shǐ jī yīn gōng chéng chéng wéi kě néng。 |
|
incision enzyme
jiǎn shù
nèi qiē méi ， jí xiàn zhì xìng hé suān nèi qiē méi 。 yì chēng xiàn zhì xìng hé suān méi。 zhè shì yī lèi néng cóng DNA fènzǐ zhōng jiān shuǐ jiě lín suān 'èr zhǐ jiàn , cóng 'ér qiē duàn shuāng liàn DNA de hé suān shuǐ jiě méi。 tā men bù tóng yú yī bān de tuō yǎng hé táng hé suān méi（ DNase） , tā men de qiē diǎn dà duō hěn yán gé， yào qiú zhuān yī de hé gān suān shùn xù héng héng shí bié shùn xù。 cháng qī yǐ lái， nán yǐ shēn rù yán jiū de DNA dà fēn zǐ , jiè cǐ kě yǐ qiē gē chéng tè dìng de xiǎo piàn duàn lái fēn xī。 xiàn zhì xìng hé suān méi de fā xiàn , wéi jī yīn jié gòu、 DNA jiǎn jī shùn xù fēn xī hé jī yīn gōng chéng de yán jiū kāipì liǎo tú jìng。 wèicǐ， W. ā 'ěr bó， H. shǐ mì sī hé D. nèi sēn sī sān rén gòng tóng huò dé liǎo 1978 nián nuò bèi 'ěr shēng lǐ xué huò yī xué jiǎng。
yī zhǒng néng cuī huà duō hé gān suān de liàn duàn liè de méi， zhǐ duì tuō yǎng hé táng hé suān nèi yī dìng jiǎn jī xù liè zhōng mǒu yī dìng wèi zhì fā shēng zuò yòng， bǎ zhè wèi zhì de liàn qiē kāi。 tōng guò nèi qiē méi kě yǐ bǎ mǒu yī gè yí chuán jī yīn qiē xià lái， ruò zài lián zài bié de xì bāo de yí chuán jī yīn shàng， biàn kě shǐ zhè xì bāo jù yòu xīn de yí chuán tè xìng。 nèi qiē méi de fā xiàn hé cǎi yòng， shǐ jī yīn gōng chéng chéng wéi kě néng。 |
|
nèi qiē méi zhù yào fēn chéng sān dà lèi。 dì yī lèi nèi qiē méi néng shí bié zhuān yī de hé gān suān shùn xù， bìng zài shí bié diǎn fù jìn de yī xiē hé gān suān shàng qiē gē DNA fènzǐ zhōng de shuāng liàn， dàn shì qiē gē de hé gān suān shùn xù méi yòu zhuān yī xìng， shì suí jī de。 zhè lèi xiàn zhì xìng nèi qiē méi zài DNA zhòng zǔ jì shù huò jī yīn gōng chéng zhōng méi yòu duō dà yòng chù， wú fǎ yòng yú fēn xī DNA jié gòu huò kè lóng jī yīn。 zhè lèi méi rú EcoB、 EcoK děng。
dì 'èr lèi nèi qiē méi néng shí bié zhuān yī de hé gān suān shùn xù， bìng zài gāi shùn xù nèi de gù dìng wèi zhì shàng qiē gē shuāng liàn。 yóu yú zhè lèi xiàn zhì xìng nèi qiē méi de shí bié hé qiē gē de hé gān suān dōushì zhuān yī de。 suǒ yǐ zǒng néng dé dào tóng yàng hé gān suān shùn xù de DNA piàn duàn， bìng néng gòu jiàn lái zì bù tóng jī yīn zǔ de DNA piàn duàn， xíng chéng zá hé DNA fènzǐ。 yīn cǐ， zhè zhǒng xiàn zhì xìng nèi qiē méi shì DNA zhòng zǔ jì shù zhōng zuì cháng yòng de gōng jù méi zhī yī。 zhè zhǒng méi shí bié de zhuān yī hé gān suān shùn xù zuì cháng jiàn de shì 4 gè huò 6 gè hé gān suān， shǎo shù yě yòu shí bié 5 gè hé gān suān yǐ jí 7 gè、 9 gè、 10 gè hé 11 gè hé gān suān de。 rú guǒ shí bié wèi zhì zài DNA fènzǐ zhōng fēn bù shì suí jī de， zé shí bié 4 gè hé gān suān de xiàn zhì xìng nèi qiē méi měi gé 46（ 4096） gè hé gān suān jiù yòu yī gè qiē diǎn。 rén de dān bèi tǐ jī yīn zǔ jù gū jì wéi 3×199 hé gān suān， shí bié 4 gè hé gān suān de xiàn zhì xìng nèi qiē méi de qiē diǎn jiāng yòu（ 3×109/2.5×102） yuē 107 gè qiē diǎn， yě jiù shì kě bèi zhè zhǒng méi qiē chéng 107 piàn duàn， shí bié 6 gè hé gān suān de xiàn zhì xìng nèi qiē méi yě jiāng yòu（ 3×109/4×103） yuē 106 gè qiē diǎn。
dì 'èr lèi nèi qiē méi de shí bié shùn xù shì yī gè huí wén duìchèn shùn xù， jí yòu yī gè zhōng xīn duìchèn zhóu， cóng zhè gè zhóu cháo 'èr gè fāng xiàng “ dú ” dū wán quán xiāng tóng。 zhè zhǒng méi de qiē gē kě yǐ yòu liǎng zhǒng fāng shì。 yī shì jiāo cuò qiē gē， jiēguǒ xíng chéng liǎng tiáo dān liàn mò duān， zhè zhǒng mò duān de hé gān suān shùn xù shì hù bǔ de， kě xíng chéng qīng jiàn， suǒ yǐ chēng wéi nián xìng mò duān。 rú EcoRI de shí bié shùn xù wéi：
↓ |
5 ’ …… GAA|TTC…… 3’
3’…… CTT|AAG…… 5’
| ↑
chuí zhí xū xiàn biǎo shì zhōng xīn duìchèn zhóu， cóng liǎng cè“ dú” hé gān suān shùn xù dōushì GAATTC huò CTTAAG， zhè jiù shì huí wén shùn xù（ palindrome）。 shí xiàn jiǎn tóu biǎo shì zài shuāng liàn shàng jiāo cuò qiē gē de wèi zhì， qiē gē hòu shēng chéng 5’…… G hé AATTC…… 3’、 3’…… CTTAA hé G…… 5’ èr gè DNA piàn duàn， gè yòu yī gè dān liàn mò duān， èr tiáo dān liàn shì hù bǔ de， kě tōng guò xíng chéng qīng jiàn 'ér“ zhānhé”。 lìng yī zhǒng shì zài tóng yī wèi zhì shàng qiē gē shuāng liàn， chǎn shēng píng tóu mò duān。 lì rú Hae Ⅲ de shí bié wèi zhì shì：
↓
5’…… GG↓ CC…… 3’
3’…… CC↓ GG……’
↑
zài jiàn tóu suǒ zhǐ chù qiē gē， chǎn shēng de liǎng gè DNA piàn duàn shì：
5’…… GGCC…… 3’
hé
3’…… CCGG…… 5’
yòu shí hòu liǎng zhǒng xiàn zhì xìng nèi qiē méi de shí bié hé gān suān shùn xù hé qiē gē wèi zhì dū xiāng tóng， chā bié zhǐ zài yú dāng shí bié shùn xù zhōng yòu jiá jī huà de hé gān suān shí， yī zhǒng xiàn zhì xìng nèi qiē méi kě yǐ qiē gē， lìng yī zhǒng zé bù néng。 lì rú Hpa Ⅱ hé Msp Ⅰ de shí bié shùn xù dōushì 5’…… GCGG…… 3’， rú guǒ qí zhōng yòu 5’ - jiá jī bāo mì dìng， zé zhǐ yòu HpaⅡ néng gòu qiē gē。 zhè xiē yòu xiāng tóng qiē diǎn de méi chēng wéi tóng qiē méi huò yì yuán tóng gōng méi（ isoschizomer）。
dì sān lèi nèi qiē méi yě yòu zhuān yī de shí bié shùn xù， dàn bù shì duìchèn de huí wén shùn xù。 tā zài shí bié shùn xù bàng biān jǐ gè hé gān suān duì de gù dìng wèi zhì shàng qiē gē shuāng liàn。 dàn zhè jǐ gè hé gān suān duì zé shì rèn yì de。 yīn cǐ， zhè zhǒng xiàn zhì xìng nèi qiē méi qiē gē hòu chǎn shēng de yī dìng cháng dù DNA piàn duàn， jù yòu gè zhǒng dān liàn mò duān。 zhè duì yú kè lóng jī yīn huò kè lóng DNA piàn duàn méi yòu duō dà yòng chù。 |
nèi qiē méi yòng yú kè lóng PCR |
kè lóng PCR chǎn wù de fāng fǎ zhī yī， shì zài PCR chǎn wù liǎng duān shè jì yī dìng de xiàn zhì méi qiē wèi diǎn， jīng méi qiē hòu kè lóng zhì yòng xiāng tóng méi qiē de zài tǐ zhōng。 dàn shí yàn zhèng míng， dà duō shù xiàn zhì méi duì luǒ lù de méi qiē wèi diǎn bù néng qiē duàn。 bì xū zài méi qiē wèi diǎn bàng biān jiā shàng yī gè zhì jǐ gè bǎo hù jiǎn jī， cái néng shǐ suǒ dìng de xiàn zhì méi duì qí shí bié wèi diǎn jìn xíng yòu xiào qiē duàn。
méi qiē wèi diǎn（ nèi qiē méi de shí bié xù liè） yào jiā zài yǐn wù de 5' duān， wéi bǎo zhèng PCR chǎn wù néng bèi xiàn zhì xìng nèi qiē méi de shí bié qiě yòu xiào de méi qiē， yī bān zài yǐn wù de 5' duān méi qiē wèi diǎn cè biān jiā shàng bǎo hù jiǎn jī。
jù tǐ wéi： 5'- bǎo hù jiǎn jī ＋ méi qiē wèi diǎn＋ yǐn wù xù liè -3'
xiáng xì kě cān jiàn， rú xià tú： |
|
| xìng nèi qiē méi | hé suān nèi qiē méi | tài liàn nèi qiē méi | | xiàn dìng xìng nèi qiē méi | xiàn zhì xìng nèi qiē méi | xiàn zhì xìng hé suān nèi qiē méi | | xiàn zhì xìng nèi qiē méi tú pǔ | xiàn zhì xìng nèi qiē méi xiāo huà | 24,11- tài liàn nèi qiē méi | | xiàn zhì xìng hé suān nèi qiē méi tú pǔ fēn xī | AP hé suān nèi qiē méi | dna xiàn zhì xìng nèi qiē méi xiāo huà | | DNA xiàn zhì xìng nèi qiē méi méi qiē | dà cháng gǎnjūn hé suān nèi qiē méi | dà cháng gǎnjūn xiàn zhì xìng hé suān nèi qiē méi | | hé táng hé suān nèi qiē méi xiǎo niú xiōng xiàn | tóng qièkǒu xiàn zhì xìng nèi qiē méi | |
|