wēi shēng wù > jiào mǔ shuāng zá jiāo
mùlù
No. 1
　　( yī ) jī běn yuán lǐ
　　 jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng yóu fields hé song děng shǒu xiān zài yán jiū zhēn hé jī yīn zhuǎn lù tiáokòng zhōng jiàn lì i。 diǎn xíng de zhēn hé shēngzhǎng zhuǎn lù yīn zǐ， rú gal4、 gcn4、 děngdōu hán yòu 'èr gè bù tóng de jié gòu yù :dna jié hé jié gòu yù (dna-bindingdomain) hé zhuǎn lù jī huó jié gòu yù (transcription-activatingdomain)。 qián zhě kě shí bié dna shàng de tè yì xù liè， bìng shǐ zhuǎn lù jī huó jié gòu yù dìng wèi yú suǒ tiáojié de jī yīn de shàng yóu， zhuǎn lù jī huó jié gòu yù kě tóng zhuǎn lù fù hé tǐ de qí tā chéngfèn zuò yòng， qǐ dòng tā suǒ tiáojié de jī yīn de zhuǎn lù。 èr gè jié gòu yù bù dàn kě zài qí lián jiē qū shìdàng bù wèi dǎ kāi， réng jù yòu gè zì de gōng néng。 ér qiě bù tóng liǎng jié gòu yù kě chóngjiàn fā huī zhuǎn lù jī huó zuò yòng。 jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng lì yòng zá jiāo jī yīn tōng guò jī huó bào dào jī yīn de biǎo dá tàn cè dàn bái － dàn bái de xiāng hù zuò yòng。 zhù yào yòu 'èr lèi zài tǐ :a hán dna-bindingdomain de zài tǐ ;b hán dna-activatingdomain de zài tǐ。 shàng shù 'èr lèi zài tǐ zài gòu jiàn róng hé jī yīn shí， cè shì dàn bái jī yīn yǔ jié gòu yù jī yīn bì xū zài yuè dú kuàng nèi róng hé。 róng hé jī yīn zài bào gào zhū zhōng biǎo dá， qí biǎo dá chǎn wù zhǐ yòu dìng wèi yú hé nèi cái néng qū dòng bào gào jī yīn de zhuǎn lù。 lì rú gal4-bd jù yòu hé dìng wèi xù liè (nuclear-localizationsequence)， ér gal4-ad méi yòu。 yīn cǐ， zài gal4-ad 'ān jī duān huò suō jī duān yìng kè lóng lái zì sv40 de t- kàng yuán de yī duàn xù liè zuò wéi hé dìng wèi de xù liè。 mù qián yán jiū zhōng cháng yòng binding-domain jī yīn yòu： gal4(1-147);lexa(ecoli zhuǎn lù yì zhì yīn zǐ ) de dna-bd biān mǎ xù liè。 cháng yòng de activating-domain jī yīn yòu： gal4(768-881) hé pào zhěn bìng dú vp16 de biān mǎ xù liè děng。
　　 shuāng zá jiāo xì tǒng de lìng yī gè zhòng yào de yuán jiàn shì bào dào zhū。 bào dào zhū zhǐ jīng gǎi zào de、 hán bào dào jī yīn (reportergene) de zhòng zǔ zhì lì de sù zhù xì bāo。 zuì cháng yòng de shì jiào mǔ xì bāo， jiào mǔ xì bāo zuò wéi bào dào zhū de jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng jù yòu xǔ duō yōu diǎn : 〈 1 〉 yì yú zhuǎn huà、 biàn yú huí shōu kuò zēng zhì lì。〈 2〉 jù yòu kě zhí jiē jìn xíng xuǎn zé de biāo jì jī yīn hé tè zhēng xìng bào dào jī yīn。〈 3〉 jiào mǔ de nèi yuán xìng dàn bái bù yì tóng lái yuán yú bǔ rǔ dòng wù de dàn bái jié hé。 yī bān biān mǎ yī gè dàn bái de jī yīn róng hé dào míng què de zhuǎn lù tiáokòng yīn zǐ de dna－ jié hé jié gòu yù ( rú gal4-bd， lexa-bd)； lìng yī gè jī yīn róng hé dào zhuǎn lù jī huó jié gòu yù ( rú gal4-ad， vp16)。 jī huó jié gòu yù róng hé jī yīn zhuǎn rù biǎo dá jié hé jié gòu yù róng hé jī yīn de jiào mǔ xì bāo xì zhōng， dàn bái jiān de zuò yòng shǐ dé zhuǎn lù yīn zǐ chóngjiàn dǎo zhì xiāng lín de bào dào jī yīn biǎo dá ( rú lacz)， cóng 'ér kě fēn xī dàn bái jiān de jié hé zuò yòng。
　　 jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng néng zài tǐ nèi cè dìng dàn bái zhì de jié hé zuò yòng， jù yòu gāo dù mǐn gǎn xìng。 zhù yào shì yóu yú： ① cǎi yòng gāo kǎo bèi hé qiáng qǐ dòng zǐ de biǎo dá zài tǐ shǐ zá hé dàn bái guò liàng biǎo dá。 ② xìn hào cè dìng shì zài zì rán píng héng nóng dù tiáo jiàn xià jìn xíng， ér rú miǎn yì gòng chén diàn děng wù lǐ fāng fǎ wéi dá dào cǐ tiáo jiàn xū jìn xíng duō cì xǐ dí， jiàng dī liǎo xìn hào qiáng dù。 ③ zá jiāo dàn bái jiān wěn dìng dù kě bèi jī huó jié gòu yù hé jié hé jié gòu yù jié hé xíng chéng zhuǎn lù qǐ shǐ fù hé wù 'ér zēng qiáng， hòu zhě yòu yǔ qǐ dòng zǐ dna jié hé， cǐ sān yuán fù hé tǐ shǐ qí zhōng gè zǔ fēn de jié hé qū yú wěn dìng。 ④ tōng guò mrna chǎn shēng duō zhǒng wěn dìng de méi shǐ xìn hào fàng dà。 tóng shí， jiào mǔ biǎo xíng， x-gal jí his3 dàn bái biǎo dá děng jiǎn cè fāng fǎ jūn hěn mǐn gǎn。
　　( èr ) jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng de yìng yòng
　　1 tè diǎn yǔ yōu diǎn
　　 jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng de zuì zhù yào de yìng yòng shì kuài sù、 zhí jiē fēn xī yǐ zhī dàn bái zhī jiān de xiāng hù zuò yòng jí fēn lí xīn de yǔ yǐ zhī dàn bái zuò yòng de pèi tǐ jí qí biān mǎ jī yīn。 jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng jiǎn cè dàn bái zhī jiān de xiāng hù zuò yòng jù yòu yǐ xià yōu diǎn : ⑴ zuò yòng xìn hào shì zài róng hé jī yīn biǎo dá hòu， zài xì bāo nèi chóngjiàn zhuǎn lù yīn zǐ de zuò yòng 'ér gěi chū de， shěng qù liǎo chún huà dàn bái zhì de fán suǒ bù zhòu。 ⑵ jiǎn cè zài huó xì bāo nèi jìn xíng， kě yǐ zài yī dìng chéng dù shàng dài biǎo xì bāo nèi de zhēn shí qíng kuàng。 ⑶ jiǎn cè de jiēguǒ kě yǐ shì jī yīn biǎo dá chǎn wù de jī lěi xiào yìng， yīn 'ér kě jiǎn cè cún zài yú dàn bái zhì zhī jiān de wēi ruò de huò zàn shí de xiāng hù zuò yòng。 ⑷ jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng kě cǎi yòng bù tóng zǔ zhì、 qì guān、 xì bāo lèi xíng hé fēn huà shí qī cái liào gòu jiàn cdna wén kù， néng fēn xī xì bāo jiāng、 xì bāo hé jí mó jié hé dàn bái děng duō zhǒng bù tóng yà xì bāo bù wèi jí gōng néng de dàn bái。 lì rú yǐ bào dào chéng gōng fēn xī liǎo rap1 yǔ rif1ii、 p21cip1 yǔ cdk2iii、 p16 yǔ cdk4iv děng zhī jiān de xiāng hù zuò yòng。
　　2 jié gòu zǔ chéng
　　 jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng kě yìng yòng yú què dìng liǎng yǐ zhī yòu shēng lǐ zuò yòng de dàn bái jiān de zuò yòng wèi diǎn huò jié gòu yù。 lì yòng cǐ xì tǒng yǐ fēn xī hé cè dìng liǎo duō zhǒng zhòng yào jié gòu yù， rú p85 sān lín suān jī chún jī méi hé p110 yà dān wèi zuò yòng de jié gòu yù v， p21cip1 dàn bái yǔ zēng zhí xì bāo mó kàng yuán (proliferating-cellnuclearantigen， pcna) de jié hé xù liè vi děng。
　　 cǐ wài jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng hái yìng yòng yú chǎn míng dàn bái zhì xiāng hù zuò yòng de jié gòu yù， huì zhì dàn bái zhì lián xì tú pǔ， zài yào wù shè jì děng xǔ duō fāng miàn。
　　( sān ) jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng jú xiàn xìng hé cún zài de wèn tí
　　 jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng shì fēn xī dàn bái - dàn bái jiān xiāng hù zuò yòng de yòu xiào hé kuài sù de fāng fǎ， yòu duō fāng miàn de yìng yòng， dàn réng cún zài yī xiē jú xiàn xìng。⑴ shuāng zá jiāo xì tǒng fēn xī dàn bái jiān de xiāng hù zuò yòng dìng wèi yú xì bāo hé nèi， ér xǔ duō dàn bái jiān de xiāng hù zuò yòng yǐ lài yú fān yì hòu jiā gōng rú táng jī huà、 èr liú jiàn xíng chéng děng， zhè xiē fǎn yìng zài hé nèi wú fǎ jìn xíng。 lìng wài yòu xiē dàn bái de zhèng què zhé dié hé gōng néng yòu lài yú qí tā fēi jiào mǔ dàn bái de fǔ zhù， zhè xiàn zhì liǎo mǒu xiē xì bāo wài dàn bái hé xì bāo mó shòu tǐ dàn bái děng de yán jiū。⑵ jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng de yī gè zhòng yào de wèn tí shì " jiǎ yáng xìng "。 yóu yú mǒu xiē dàn bái běn shēn jù yòu jī huó zhuǎn lù gōng néng huò zài jiào mǔ zhōng biǎo dá shí fā huī zhuǎn lù jī huó zuò yòng， shǐ dna jié hé jié gòu yù zá jiāo dàn bái zài wú tè yì jī huó jié gòu yù de qíng kuàng xià kě jī huó zhuǎn lù。 lìng wài mǒu xiē dàn bái biǎo miàn hán yòu duì duō zhǒng dàn bái zhì de dī qīn hé lì qū yù， néng yǔ qí tā dàn bái xíng chéng wěn dìng de fù hé wù， cóng 'ér yǐn qǐ bào gào jī yīn de biǎo dá， chǎn shēng " jiǎ yáng xìng " jiēguǒ。
　　 xǔ duō yán jiū zhě duì shuāng zá jiāo xì tǒng jìn xíng liǎo gǎi jìn hé fā zhǎn，。 lì rú cǎi yòng jiǎ yáng xìng xiǎn shì fēn xī fǎ hé shuāng shāi xuǎn xì tǒng yǐ jiǎn shǎo " jiǎ yáng xìng " de fā shēng； fā zhǎn bǔ rǔ dòng wù shuāng zá jiāo xì tǒng gèng hǎo dì yán jiū dàn bái jiāng de xiāng hù zuò yòng。 qí zhōng shuāng shāi xuǎn xì tǒng yòng 'èr zhǒng bù tóng de bào gào jī yīn ( cháng yòng lacz hé his3) yòu yǐ xià yōu shì vii:⑴ yòng bù tóng de qǐ dòng zǐ biǎo dá wèi yú jiào mǔ 'èr gè rǎn sè tǐ shàng de bào gào jī yīn， kě míng xiǎn jiǎn shǎo jiǎ yáng xìng。⑵ tōng guò yíng yǎng xíng shāi xuǎn zēng qiáng liǎo shāi xuǎn néng lì， yóu qí shì yòng yú duì jiào dà de kù róng liàng 'ér bèi xuǎn dàn bái jiào shǎo qíng kuàng xià de shāi xuǎn。
　　 bǔ rǔ dòng wù shuāng zá jiāo xì tǒng viii yě shì yī zhǒng jī yīn shuǐ píng shàng yǐ chóngjiàn zhuǎn lù yīn zǐ gōng néng wéi jī chǔ de tǐ nèi fēn xī fāng fǎ。 zài cǐ xì tǒng zhōng， yī zhǒng gǎn xìng qù de dàn bái yǔ gal4--dna jié hé jié gòu yù gòu chéng róng hé dàn bái， lìng yī zhǒng dàn bái yǔ dān chún pào zhěn bìng dú vp16 dàn bái de jī huó jié gòu yù yǐ róng hé dàn bái biǎo dá。 biǎo dá zhè xiē róng hé dàn bái de zài tǐ yǔ yī gè bào dào zài tǐ（ cat） gòng tóng zhuǎn rǎn bǔ rǔ dòng wù xì bāo xì。 bào dào zhì lì hán yī gè gal4 jié hé wèi diǎn xià yóu de cat jī yīn。 jiǎ rú liǎng gè róng hé dàn bái xiāng hù zuò yòng zé cat bào dào jī yīn biǎo dá shuǐ píng míng xiǎn zēng gāo。 yòng cǐ xì tǒng zhèng shí liǎo p53 dàn bái yǔ dà t kàng yuán de xiāng hù zuò yòng， dé dào liǎo jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng xiāng tóng de jiēguǒ。 qiě jiào jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng gèng wéi kuài sù， zài zhuǎn rǎn 48h nèi dé dào jiēguǒ。 bìng qiě zài bǔ rǔ dòng wù xì bāo néng gèng hǎo mó fǎng tǐ nèi de dàn bái - dàn bái xiāng hù zuò yòng。 yīn 'ér， bǔ rǔ dòng wù shuāng zá jiāo xì tǒng kě zuò wéi jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng de fǔ zhù shǒu duàn
bāo hán cí
jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒngjiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng yuán lǐfǎn xiàng jiào mǔ shuāng zá jiāo xì tǒng