bān diǎn zá jiāo（ dotblot） shì jiāng bèi jiǎn biāo běn diǎn dào mó shàng， hōng kǎo gù dìng。 zhè zhǒng fāng fǎ hào shí duǎn， kě zuò bàn dìng liàng fēn xī。 yī zhāng mó shàng kě tóng shí jiǎn cè duō gè yàng pǐn， wéi shǐ diǎn yàng zhǔn què fāng biàn， shì shòu yòu duō zhǒng duō guǎn xī yìn yí（ manifold）， rú minifold Ⅰ hé Ⅱ、 bio-dot(bio-rad) hé hybri-dot， tā men yòu xǔ duō kǒng， yàng pǐn jiā dào kǒng zhōng， zài fù yā xià jiù huì liú dào mó shàng chéng bān diǎn zhuàng huò xiáfèng zhuàng。 fǎn fù chōng xǐ jìn yàng kǒng， qǔ chū mó kǎo gān huò zǐ wài xiàn zhào shè yǐ gù dìng biāo běn， zhè shí de mó jiù kě yǐ jìn xíng zá jiāo。
（ 1） dna bān diǎn zá jiāo：
① xiān jiāng mó zài shuǐ zhōng jìn shī， zài fàng dào 15×ssc zhōng。
② jiāng dna yàng pǐn róng yú shuǐ huò te， zhǔ fèi 5min， bīng zhōng sù lěng。
③ yòng qiān bǐ zài lǜ mó shàng biāo hǎo wèi zhì , jiāng dna diǎn yàng yú mó shàng , měi gè yàng pǐn yī bān diǎn 5μl(2~10μgdna)。
④ jiāng mó hōng gān， mì fēng bǎo cún bèi yòng。
（ 2） rna bān diǎn zá jiāo： yǔ shàng fǎ lèi sì， měi gè yàng pǐn zhì duō jiā 10μg zǒng rna（ jīng fēn / lǜ fǎng huò yì liú qíng suān guā tí qǔ chún huà）， fāng fǎ shì jiāng rna róng yú 5μldepc shuǐ， jiā 5μl jiá quán /ssc huǎn chōng yè（ 10×ssc zhōng hán 6.15mol/l jiá quán）， shǐ rna biàn xìng， rán hòu qǔ 5-8μl diǎn yàng yú chǔlǐ hǎo de lǜ mó shàng， hōng gān。
（ 3） wán zhěng xì bāo bān diǎn zá jiāo： yìng yòng lèi sì jiǎn cè xì jūn jūn luò de fāng fǎ， kě yǐ duì xì bāo péi yǎng wù de tè yì xù liè jìn xíng kuài sù jiǎn cè， jiāng zhěng gè xì bāo diǎn dào mó shàng， jīng naoh chǔlǐ， shǐ dna bào lù、 biàn xìng hé gù dìng， zài 'àn cháng guī fāng fǎ jìn xíng zá jiāo yǔ jiǎn cè。 yòu rén céng yòng cǐ fǎ cóng 105 gè péi yǎng xì bāo zhōng jiǎn cè dào zhì shǎo 5pg de epstein-barr bìng dú dna。 wán zhěng xì bāo bān diǎn yìn jì fǎ kě yǐ yòng yú shāi xuǎn dà liàng biāo běn， yīn wéi tā shǐ xì bāo zhí jiē zài mó shàng róng jiě， suǒ yǐ dna hán liàng shèn zhì bǐ cháng yòng de tí qǔ fǎ hái gāo， yòu bù yǐng xiǎng yǔ 32p biāo jì de tàn zhēn zá jiāo， dàn tā bù shì yòng yú fēi fàng shè xìng biāo jì tàn zhēn， yīn wéi dna chún dù bù gòu， huì chǎn shēng gāo běn dǐ。 |
|
|